在微生物檢測中,菌落總數空白長(cháng)菌意味著(zhù)在未添加待測樣品的空白對照培養基上出現了菌落生長(cháng),這通常是不正常的情況,可能由多種因素導致,以下為你詳細分析:
1、實(shí)驗用品污染
培養基污染
原因:培養基在制備、滅菌或儲存過(guò)程中可能受到污染。例如,滅菌不徹底,未能有效殺滅其中存在的微生物;儲存條件不當,如溫度過(guò)高、濕度過(guò)大或儲存時(shí)間過(guò)長(cháng),導致培養基中的成分變質(zhì),滋生微生物。
舉例:若培養基在高壓蒸汽滅菌時(shí),壓力或時(shí)間未達到要求,就可能無(wú)法完全殺滅其中的芽孢等耐熱微生物,后續在適宜的培養條件下,這些微生物就會(huì )生長(cháng)繁殖形成菌落。
培養皿、移液管等器皿污染
原因:這些器皿在清洗、包裝或滅菌過(guò)程中出現問(wèn)題。比如清洗不徹底,殘留有有機物或微生物;包裝不嚴密,在滅菌前或儲存過(guò)程中被污染;滅菌后放置時(shí)間過(guò)長(cháng),受到環(huán)境中的微生物污染。
舉例:培養皿在清洗后未完全晾干就進(jìn)行包裝滅菌,水分殘留可能導致滅菌不徹底,殘留的微生物在培養時(shí)生長(cháng)。
試劑污染
原因:實(shí)驗中使用的稀釋液、生理鹽水等試劑可能被污染。試劑在配制、儲存或使用過(guò)程中,如果受到環(huán)境微生物的侵入,就可能成為污染源。
舉例:稀釋液在配制時(shí),使用的蒸餾水質(zhì)量不佳,含有微生物,或者配制后的稀釋液儲存容器未進(jìn)行嚴格滅菌,都可能導致試劑污染。
2、操作過(guò)程污染
無(wú)菌操作不規范
原因:實(shí)驗人員在接種、稀釋等操作過(guò)程中,未嚴格遵守無(wú)菌操作規程。例如,未在超凈工作臺中進(jìn)行操作,或者操作時(shí)未正確佩戴手套、口罩,手部消毒不徹底,導致環(huán)境中的微生物進(jìn)入空白樣品。
舉例:在接種過(guò)程中,實(shí)驗人員的手部接觸到培養皿邊緣,將手上的微生物帶入培養基,從而在空白培養基上形成菌落。
交叉污染
原因:在操作過(guò)程中,不同樣品之間或樣品與空白之間發(fā)生了交叉污染。比如,使用同一支移液管吸取不同樣品,未及時(shí)更換或清洗;或者在操作臺上同時(shí)放置多個(gè)樣品,導致微生物擴散。
舉例:在稀釋樣品時(shí),使用同一支移液管先吸取了含菌樣品,未進(jìn)行清洗和滅菌就直接吸取空白樣品的稀釋液,將含菌樣品中的微生物帶入了空白樣品。
3、環(huán)境因素
實(shí)驗環(huán)境不潔凈
原因:實(shí)驗操作環(huán)境中的空氣、桌面等存在大量微生物。如果超凈工作臺未正常運行或過(guò)濾效果不佳,空氣中的微生物會(huì )落入空白培養基;桌面未進(jìn)行徹底消毒,也可能成為微生物的來(lái)源。
舉例:超凈工作臺的過(guò)濾網(wǎng)長(cháng)時(shí)間未更換,導致過(guò)濾效果下降,空氣中的灰塵和微生物進(jìn)入操作區域,污染空白培養基。
人員活動(dòng)影響
原因:實(shí)驗人員在操作過(guò)程中頻繁走動(dòng)、說(shuō)話(huà)等,會(huì )帶動(dòng)空氣流動(dòng),增加空氣中微生物進(jìn)入空白樣品的機會(huì )。
舉例:實(shí)驗人員在接種過(guò)程中大聲說(shuō)話(huà),唾液飛沫可能攜帶微生物落入空白培養基。